A：Q6B的适用范围是什么？

　　B：Q6B指导原则适用于蛋白质、多肽及其衍生物和含有这些成分的产品，这些蛋白质和多肽由基因重组或非重组工程细胞培养表达系统生产，可被高度纯化，并可用一套适宜的分析方法予以鉴定。此外还适用于从动物组织或体液中分离的蛋白质和多肽。不涵盖抗生素、合成肽、肝素、维生素、细胞代谢物、DNA产品、传统疫苗、细胞和血液制品。

　　A：生物制品质量标准的制定需要考虑哪些因素？

　　B：制定质量标准时需要分析生物制品的特性，包括理化特征、生物学活性、免疫化学性质、纯度和杂质的确证和含量。

　　蛋白质最明显的特征是具有结构异质性。因为目的产品可能是翻译修饰后形成的各种形式的混合体，并且这些形式可能具有活性，所以它们的存在可能会对产品的安全性和有效性产生不利影响。

　　A：生产商是否需要详细研究目的产物的异质性谱以证明临床前及临床研究用批次是否具有一致性？

　　B：生产商会面临以下两种情况：①若已证明每批产品异质性的类型是固定的，则不再需要评价每种异构体对产品有效性和安全性的影响。②异质性在原液和成品的生产或贮存过程中产生，由于这类产品的异质性决定它们的质量，所以需要对异质性的程度和类型进行鉴定以确保批次的一致性。若由于工艺改变或产品降解而导致异质性图谱与临床前和开发所用产品的不一致，则需要对这些改变的影响做出评价。

　　A：有哪些方法可以检测生物学活性？

　　B：如基于细胞培养的生物学活性检测方法，是在细胞水平上测定产品的生化生理效应；基于动物的生物学活性检测方法，用于测定生物机体对产品产生的生物反应；生化方法，利用酶反应速率或者免疫相互作用诱导的生物反应测定生物活性。生物活性测定的结果应用经过国际或国家参比标准品校准后的活性单位表示。若没有标准品，则需要建立内部参考物质，各批次产品的测定结果以内部定义的单位表示。

　　A：对于复杂分子，获得的大量理化学资料往往不能确定其高级结构，需从产品生物学活性加以推论。单独选用理化方法需要具备哪些条件？

　　B：一是产品的高级结构可以完全用理化方法确立，并能证明与生物活性的相关性；二是已建立了完整的生产历史档案。需要注意当单独采用理化方法定量生物活性（根据合适的相关性）时，结果应采用质量表示。

　　A：对于其他因素还有哪些要求？

　　B：免疫化学性质可用于产品的鉴别、均一性或纯度测定，也可用于定量。当产品是抗体时，需要对它的免疫学性质进行全面鉴定。同时还要进行抗体与抗原以及抗原特定区域的结合试验，用来确定亲和力、亲和性和免疫反应性。

　　含量一般用蛋白质测定表示，它对生物制品至关重要。通常选择合适的物理化学方法测定。有时还要证明所得到的定量结果直接与生物学方法的检测结果相关。如果已经证实了相关性，在生产过程中也可以采用含量测定代替生物活性测定，如灌装工艺。

　　测定纯度对生物制品而言较为困难，因其测定结果往往高度依赖于分析方法。以往生物制品的相对纯度用比活来表示，但是结果同样高度依赖所用的方法，因此原液和成品纯度一般是采用几种方法联合检测。

　　除了纯度，生产商还需要对可能出现的杂质和产品污染物进行评估。

　　A：如何定义产品污染物？

　　B：产品污染物是指非生产工艺预期部分的外源性物质，如化学及生化物质或微生物。它跟降解产物和杂质不同。应严格避免污染物，并采用合适的过程控制验收标准或原液或成品的行动限来控制。对于外源性病毒和支原体污染，行动限不再适用，而应考虑采用ICH两个指导原则提出的原则，即“生物制品的质量：来源于人或动物细胞系生物制品的病毒安全性评价”和“生物制品的质量：用于生物制品生产的细胞基质的来源和鉴定”。

　　A：如何定义杂质？

　　B：杂质是存在于原液或成品中的非预期产品、非产品相关物质或是非辅料的任何组成部分，它的存在与工艺或产品有关。杂质的结构可以是已知的，或得到部分鉴定的，或未得到鉴定的。如果可以获取足够量的杂质，应尽可能对这些杂质予以鉴定，如条件许可，还应评估其生物学活性。此外，杂质的验收标准要根据临床前和临床研究批次的数据及生产一致性验证批次的研究数据制定。

　　A：工艺相关杂质和产品相关杂质有什么区别？

　　B：工艺相关杂质是指生产过程中产生的杂质，如细胞基质（宿主细胞蛋白、宿主细胞DNA）、细胞培养物（诱导剂、抗生素或培养基成分）或下游工艺产生的杂质。产品相关杂质（如前体、某些降解产物）是在生产和（或）贮存过程中产生的分子变异体，这些变异体在活性、有效性及安全性方面与预期产品不具可比性。对产品相关杂质和工艺相关杂质应分别制订单独的和（或）合计的验收标准。

　　A：分析方法有哪些注意事项？

　　B：对于分析方法来说，一个很重要的问题是参考物质。上文提到生物活性测定的结果要用经过国际或国家参比标准品校准后的活性单位表示。但对于新分子实体的药品注册申请，一般不可能获得国际标准品或国家标准品作对比。所以在申报时，生产商需要建立经过质量特性分析的内部一级参考物质，该参考物质要采用有代表性的批次进行制备。用于产品批检验的内部工作参考物质使用一级参考品标化。申报时需要提供参考物质制造和纯化的方法、质量特性分析、贮存条件和用于保证参考品稳定性的制剂处方等资料。

　　A：质量标准制定的依据有哪些？

　　B：原液及成品质量标准的制定是全面质量控制的重要部分，其他方面还包括原材料和辅料的控制、生产工艺过程控制检测、工艺评估或验证、执行GMP的情况、稳定性研究、批间一致性检测等。综合这些全部要素，才能保证产品质量得以保持。生产商在制定质量标准时，需要依据以下几点。

　　第一，要与生产工艺相关联。质量标准的建立是以连续性生产批次的研究数据为基础的。因为工艺变更可能会产生降解产物和杂质，导致产品与临床前及临床研究的样品不一致，所以要对工艺变更带来的影响进行评价。

　　第二，要考虑原液和成品的稳定性。在贮藏过程中原液和成品可能会发生降解，此外由于产品非常复杂，很难用一种具有稳定性指标的检测方法或者参数全面地反映出来。所以，生产商需要一种可以代表产品稳定性的联合检测图谱，以确保产品质量发生改变时，可以通过图谱结果反映出来。

　　第三，要与分析方法相关联。产品的质量属性包括效价、杂质性质及含量等项目。这些项目可全部采用多种方法进行测定，但每种方法得出的结果可能不尽相同，因此质量标准必须建立在参考分析方法的基础上。另外，在产品开发过程中，往往分析技术的发展与产品开发难以同步进行。因此，保证上市申请时数据与研发阶段所得数据的相关性尤为重要。

　　第四，质量标准的建立应与临床前及临床研究相关联。应采用临床前及临床研究中所用批次的数据作为制订质量标准的依据。商业化生产规模生产的产品质量应与临床前及临床研究时所用样品一致。

　　A：生物制品有哪些检查项目？

　　B：Q6B里主要介绍原液和成品的质量标准。原液质量标准包括外观和性状、鉴别、纯度和杂质、效价和含量。成品质量标准除以上几点外，还包括一般检验项（如pH值和渗透压）和特殊剂型的额外测试。

　　A：原液和成品的鉴别试验主要内容是什么？

　　B：原液和成品的鉴别试验方法应采用以原液的特有分子结构和其他特性为基础的专一性较强的方法。可能需要多于一种的检测方法［物理化学的、生物学的和（或）免疫化学］建立鉴别方法。鉴别试验只要求定性，如产品的色谱图及其鉴别、均一性和纯度的相关数据可用分子排阻色谱、反向液相色谱等技术方法测定；异构体可用等电聚焦技术测定；对于糖蛋白，要测定糖含量（中性糖、氨基糖、唾液酸），还应尽可能分析多肽链的糖链结构、寡糖图谱（触角形状）和糖基化位点。

　　A：如何进行效价测试？

　　B：根据与生物学性质相关的产品属性，用合适的定量生物学测定方法（也称生物活性测定或效价测定）测得具有生物活性的量值。相关的经验证的生物效价测定应是生物技术或生物制品原液和（或）成品质量标准的组成部分。当原液采用一种适宜的效价测定方法时，成品可用替代方法（理化方法或生物学方法）进行定量测定，但应提供方法选择的依据。关于检查项目的具体要求请读者参考指南原文。（摘自中国医药科技出版社《ICH基础知识500问》）

(责任编辑：刘思慧)